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      公司动态

      BioTek食品安全微孔板检测解决方案

      文字:[大][中][小] 手机页面二维码 2017/12/19     浏览次数:    

                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                                引自:微信公众号 BioTek 中国

      谈到食品安全检测,可能大多数人联想到的是各种,往往高昂的成本和复杂的操作让人望而生畏,这是由于目前用于食品安全检测的方法中,薄层色谱(TLC) 样品预处理复杂,且不能定量,灵敏度低;微生物法不易筛选到特别敏感的菌株,也只能定性不能定量,易受其他抗菌药物的影响;气象色谱(GC) 及高效液相色谱(HPLC)等虽灵敏度高,但设备昂贵,样品预处理复杂,检测费用高,难以推广使用;

       

      其实,越来越多的基于微孔板系统的检测方法,能够轻松实现多项食品安全检测的项目,并且具有灵敏度高、干扰小、安全性好、污染少及操作便捷等诸多有点。本着兼容并进的主旨,大家不妨来看看BioTek提供的食品安全微孔板检测解决方案这份大餐。

       

      NO1.——酶联免疫吸附ELISA-解决方案

       

      酶联免疫吸附(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)技术20世纪70年代出现以来,就因其特异性高、敏感性强、简单迅速,不需要昂贵仪器设备,特别适合于对大量样本的筛检工作等优点,成为食品检验中较为广泛应用的方法之一。

       

      首先来看看国家标准/行业标准中涉及的基于酶联免疫分析的项目:

       

       

      针对不同的检测通量需求,BioTek贴心提供两种方案选择:

       

      PlanA 酶联免疫吸附实验解决方案:低通量

       

      PlanA是针对每日检测量有限的较低通量用户,主要结合了BioTekELx808ELx800全自动酶标仪以及ELx50全自动洗板机。

      ELx808全自动酶标仪具有精准的温度控制和超快的检测速度;ELx800小巧坚固,性价比极高。ELx50全自动洗板机主要为8、12道或16道孔板清洗所设计,并具有磁珠和滤板清洗??榭裳?。两款酶标仪都可以和ELx50全自动洗板机相互配合,完成ELISA操作中的孔板清洗和检测读数,非常适合日常操作通量在20块板以下的实验室。

      这样的组合搭配可以满足小型分析,检测实验室或工业检测实验室的日常需求,并且在全球拥有大量的在用客户。

      如果检测项目多,检测波长多样,也可以考虑全波长微孔板分光光度计计用于数据的检测,EpochEpoch2则是非常好的选择,可以满足200-1000nm全波长的检测和光谱扫描,无需更换滤光片和光源。

       

      PlanB 酶联免疫吸附实验解决方案:高通量

       

      当您的日常检测以96孔板为基准单位,批量测量,则可以选择BioTek405系列洗板机,可以满足96/384孔板的全板快速清洗;

      如果您在加样方面也有自动化的需求,EL406洗板分液系统则可以进行三种试剂的分液操作和全板清洗。作为洗板行业的金标准,专利的超声清洗与堵针探测功能可以极大的降低实验操作失败的风险,而细胞清洗、磁板和滤板清洗功能则极大的拓展了产品的应用领域。

      如果您的日常操作通量超过20块板,则可以和BioTek的自动叠板器BioStack相互对接,高通量完成孔板的传输操作。

      另外如果希望能够全自动的完成ELISA的操作流程,则可以选择BioSpa8自动化孵育器,其上所携带的机械手可以和BioTek的洗板机、微孔板检测仪相互对接,同时完成孔板的孵育、加样、清洗与检测等流程,并可以放置于超净工作台内,进行长达2周的自动化流程操作,让您免除繁复的人工操作,如下图所示:

       

      NO.2 水产品新鲜度解决方案

      水产品(鱼、虾、贝类等)新鲜度是评价水产制品质量的一个重要指标。例如鱼肉的生化变化相当复杂, 仅凭单一指标或测定方法来确定鱼的鲜度有一定的难度。目前测定鱼鲜度的方法有感官评价法、微生物学检测法、物理和化学法及生物传感器法等。生物传感器法具有体积小、灵敏度高、检测步骤简便、快速、可靠等特点,下面我们主要介绍NOVOCIB公司推出的水产品新鲜度检测试剂盒法。

      那么,生物传感器法的原理是什么呢?

      鱼、虾等生物死亡后,其肌肉中的ATP含量随之下降,ATP的含量可以代表鱼、虾的新鲜程度,因此生物传感器法是对鱼虾肌肉中ATP代谢产物的含量进行测定,这些代谢产物的含量高说明新鲜度低。

      本方法主要检测ATP的三个主要代谢产物
      1,IMP(次黄苷酸)IMP,

      2,Inosine(肌苷): Ino

      3,Hypoxanthine (次黄嘌呤):Hx


      ATP代谢示意图(什么,为什么会是这三个代谢产物?赶紧好好复习一下生物化学吧)

      对于以上三个看不见也摸不着的ATP代谢产物,伟大的生物化学家们发明了基于酶学的底物显色法从而使用颜色来追踪这些分子,由于需要检测三种代谢产物,因此也需要三种不同的酶及辅因子:

      其中,

      1可以将IMP全部转化为NADH

      2可以将IMPHx全部转化为NADH

      3可以将IMP、HxIno全部转化为NADH

      通过340nm吸收光检测来测定NADH的量

      知道了原理后,我们如何测定?

      简而言之,使用该生物传感器的检测方法就包括样品提取、加样布板、添加底物、孵育和检测这几个步骤,完全不需要洗涤哦。布板方式如下:


      96孔板布板图,每块96孔板可检测11种水产样品,按照图示区域添加酶混合物即可。

      可能忙碌的你会问:又是96孔板添加样品!如果每天我要测成千上百条鱼的新鲜度,这样加样岂不是累煞我也?不用担心,BioTek总会为您提供较贴心的解决方案,您完全可以使用Precision Power XS自动化移液工作站来完成所有的加样步骤。

      Precision Power XS自动化移液工作站

      PrecisionTM是一款全新的液体处理操作系统??梢允迪侄嘀值囊禾遄肆鞒?,是替代繁复手工移液分液的理想产品。

      PrecisionTM系统特点
      1. 替代手工加样
      2. 可选单道、8道、12道移液以及大体积分液
      3. 体积小巧,可置于标准大小的生物安全柜内
      4. 广泛兼容试管、96384孔微孔板
      5. 独特的枪头拾取技术
      6. 液面感应
      7. 经济型高端液体处理系统
      8. 使用Precision Power软件更易于安装和程序操作
      9. 可与自动化BioStack储板器相互整合

      加好样的96孔板送入BioTek具备吸收光检测的仪器中读取340nm的吸收光即可完成测定(例如EpochEpoch2),后续通过以下的运算公式,可以定量APT的三种代谢产物的百分比含量,而这个步骤,也可以通过Gen5的数据处理记忆??樽远瓿桑?/span>

      水产品新鲜度测定数据处理方法

      Epoch系列微孔板分光光度计

      全新的EpochTM 2 微孔板分光光度计采用光栅式设计,温控范围宽、震荡形式多样,极大的拓展了在生命科学实验中的应用范围,从DNA、RNA和蛋白的定量到长时动力学监测均可以胜任。用户可以通过Epoch2的超大彩色触控屏完成程序的编辑和数据分析,其Wifi和蓝牙功能也为用户提供了便捷的人机交互功能。

      Epoch2系统特点
      1. 兼容6-384孔微孔板,可选比色杯检测???/span>
      2. 200-999nm全波长检测,无需更换滤光片
      3. 专利的温控???,较高可达65
      4. 支持线性、轨道及双轨道震荡模式
      5. BioStackTM和第三方自动化设备兼容
      6. 兼容Take3微量样品检测???,较低可检测2μL的样品点
      7. Gen5触屏和PC仪器控制及数据分析软件

      因此,BioTek提供的水产品新鲜度测定的解决方案示意图如下所示:

       

       

      NO.3 抗氧化能力指数(ORAC)解决方案

      抗氧化能力指数(Oxygen Radical Absorbance Capacity, ORAC)是一种测量不同食品抗氧化能力的国际通用标准单位,即umol TE/100g,以平均总ORAC数值表示食物的抗氧化能力,检测数值愈高代表其抗氧化能力就愈强??凸鄣钠兰壑苄晕镏实目寡趸钚?,有助于人们有意识的选择必要的食品,提高健康水平和生活质量。

      测定抗氧化能力指数的原理又是什么呢?

      这个方法以偶氮类化合物AAPH作为过氧自由基来源。Sodium Fluorescein为荧光指示剂,其荧光基团会受到氧自由基的影响而改变荧光能力;维生素E水溶性类似物Trolox为定量标准,继而通过荧光微孔板分析仪进行分析。该方法广泛应用在粮食生产贮存、进出口检疫、乳品、食用油等领域。

      检测方法

      1、样本前处理:生鲜等提取物、生育酚阳性对照同荧光素溶液充分混合孵育;

      2、AAPH氧自由基供体加入,需使用仪器自动进样器,随后开始动力学监测,动力学间隔1min,持续1~2h,37℃恒定温度。

      3、检测波长:485/528nm

      4、计算方法:分别计算生育酚和样品的AUCNet AUC

        抗氧化剂作用下的荧光衰退曲线下面积与无抗氧化剂存在时自由基作用的荧光衰退曲线下面积之差,即荧光熄灭曲线的延迟部分面积Net AUC为抗氧化剂的?;っ婊ㄍ贾行毕呙婊?/span>。
      抗氧化剂的氧自由基清除能力ORAC值,又称为抗氧化剂的抗氧化能力指数,是通过荧光衰退曲线的?;っ婊氡曜伎寡趸镏实谋;っ婊啾?/span>得出。

       

       

      由于该方法需要使用荧光强度动力学读数,所以我们推荐使用BioTekFLx800Synergy机器以上的机器进行检测,可以为您带来较便捷的操作体验。

       

      ORAC检测工作流程

      使用该方法的注意事项:

      1,对pH值敏感,应采用缓冲液体系,保持pH7左右,

      2,对温度有要求,动力学需要控制在37摄氏度。

      相关认证

      目前受大众引用的食物抗氧化值列表为ORAC-07,出自美国农业部USDA非美国食品药物管理局FDA

      参考文献:Nature Protocols 2, 867 - 870 (2007)此篇文章中使用仪器即为Synergy系列

      NO.4 荧光偏振检测解决方案

      我们上一期介绍了基于吸收光的ELISA检测方法,这里我们想要推荐的是一种基于偏振光的检测法——荧光偏振免疫检测法,这是一种均相检测法,相对于ELISA而言,无需多次的清洗步骤,主要原理是荧光标记的毒素在样品缓冲液中与未荧光标记的毒素对特异性抗体的竞争性结合,分子质量越大,分子旋转速度越慢,荧光偏振值越大。特点是灵敏、快速、简单且成本低。

      荧光偏振检测的原理

      荧光偏振是Perrin1926年较初提出的一种荧光检测技术。主要是观察溶中的荧光分子,偏振光激发时,将发射偏振光,由于荧光分子的旋转,发射光的水平光强和激发光的水平光强将会不同。荧光信号的偏振和分子旋转速度相关,旋转速度又受溶液的粘度、绝对温度、分子体积和气体常数影响。如果保持粘度、温度恒定,那么旋转速度的变化主要取决于分子体积和分子重量。


      荧光偏振原理示意图

       主要检测流程

       

       该方法主要用于检测真菌毒素类

      黄曲霉毒素≥ 10ppb
      烟曲霉毒素≥1ppb
      呕吐毒素≥1ppb

      相应认证

      1. 获得美国农业部(USDA)认证
      2. 美国谷物检查、包装、储存管理局(GIPSA)的认证检测方法

      应用领域
      粮食生产贮存、进出口检疫、乳品、食用油等

           这一期我们为大家献上了我们为大家主要介绍了基于ELISA为检测原理的食品安全微孔板检测方案,水产品新鲜度、ORAC检测以及真菌毒素测定的微孔板解决方案,其实随着微孔板检测技术的发展,也出现越来越多的针对该领域的新方法,比如针对转基因食品安全性问题而开发的ELISAPCR-ELISA检测方法等等,如果您对以上我们提到的食品安全检测感兴趣,那就快和我们联系吧!

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